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蛋白酶k凍干開發

更新時間:2022-07-26 點擊次數:1838

蛋白酶K是一種從白色念珠菌分離出來的強力蛋白溶解酶,具有很高的比活性,是DNA提取的關鍵試劑。該酶在較廣的pH范圍(4?12.5)內及高溫 (50?70°C)均有活性,用于質粒或基因組 DNA、RNA的分離。在DNA提取中,主要作用是酶解與核酸結合的組蛋白,使 DNA游離在溶液中,隨后用不同方法進行抽提,除去雜質,收集DNA。EDTA等螯合劑或SDS等去垢劑均不能使之失活。蛋白酶K貯存液一般為10mg/ml或20mg/ml。 貯存于-20°C蛋白酶K在核酸純化、絲綢、醫藥、食品和釀造等領域都有著重要的應用。由于儲存和運輸需要低溫,而且反復凍融對活性也有影響,因此有必要開發一種可以長期穩定保存蛋白酶K的方法。

冷凍干燥技術是把含有水分的物料預*行降溫,凍結成固體,在一定的真空條件下使冰升華,以水蒸氣形式除去,通過二次干燥獲得低含水量的固體干燥物。

冷凍干燥是在低溫、真空狀態下完成對制品的脫水干燥過程的,相對于其他干燥方式具有很多優點,目前在生物制品、藥品的干燥方法中是主要選擇。主要體現在以下幾個方面:樣品預凍前完成全體系的分裝,保證劑量的精確性;低溫和真空下干燥,保證物質本身的理化性質和生物特性;固態的冰晶升華成為水蒸氣后形成的疏松多孔結構,凍干制品具有良好的速溶性、復水性;脫水*,重量輕,方便儲存和運輸,可以常溫運輸和儲存。

但是由于凍干過程是一個復雜的相變過程,蛋白酶K作為一種蛋白質,在冷凍干燥過程中極易受到凍干過程的低溫效應、凍結效應和脫水效應的影響,最終導致其酶活性的降低甚至失活。因此為了減少蛋白酶K酶活性在凍干過程中的損傷,篩選合適的凍干保護劑和合適的凍干工藝尤為重要。

蛋白酶K常用保護劑蔗糖、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷、肌醇、甘氨酸、L絲氨酸、α丙氨酸、PEG、BSA、EDTA、ca離子等。各種保護劑可以相互組合或者采用單一組分加合適的緩沖液等。不同的保護劑配方行成的固形物含量不一樣,所以關鍵溫度不同,采用的凍干工藝技術路線也不一樣。凍干工藝可以采用一步升華干燥法,或者階梯升溫干燥法,具體的工藝需要根據溶液的實際情況進行摸索。我公司供應凍干機可以摸索凍干工藝,助力篩選凍干配方,夠買凍干機提供技術解決方案和技術協助,助力項目開發。


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